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白色念珠菌和烟曲霉菌为鸡真菌病最常见的病原，为快速诊断鸡白色念珠菌病和烟曲霉菌病的快速诊断，建立了鸡白色念珠菌和烟曲霉菌的双重SYBR GreenⅠ荧光定量PCR 方法.从临床病料中分离白色念珠菌和烟曲霉菌，通过菌落、菌体形态结构和ITS 基因比对，对菌株进行鉴定；根据GenBank 已发表的白色念珠菌rDNA 基因和烟曲霉benAfum 基因序列，设计特异性引物，通过反应体系和反应条件优化，建立白色念珠菌和烟曲霉菌双重定量PCR；对双重定量PCR 分别进行特异性、敏感性和重复性检测.结果显示本分离菌株与GenBank 已发表的白色念珠菌和烟曲霉相应序列的序列在97％以上.合成的白色念珠菌和烟曲霉菌引物，溶解曲线各自形成单一的峰，提示引物特异性符合定量PCR 要求.标准曲线表明标准品在浓度范围内均呈现良好的线性关系.特异性检测，与黄曲霉、黑曲霉、塔宾曲霉、聚多曲霉和光滑念珠菌、克柔念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌等病原真菌无交叉反应；敏感性检测，对白色念珠菌和烟曲霉菌最低检出量分别为4.34×102CFU/mL、3.76×101CFU/mL；重复性检测，批内变异系数均小于1％；且该方法耗时短，整个PCR 过程只需2h.这些结果说明该白色念珠菌和烟曲霉菌双重定量PCR 方法，特异性强，敏感性高，重复性好，耗时短，可用于烟曲霉和白色念珠菌感染的快速检测.