杜鹃红山茶CaAPX基因的克隆及过量表达提高烟草植株的抗寒和耐热性

来源 :2016大理国际茶花大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:larrytangliang
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根据山茶(Camellia japonica Linn.)同源序列设计特异性引物,利用同源克隆和3,5-RACE技术,从杜鹃红山茶(C.azalea)嫩叶组织中克隆出抗坏血酸过氧化物酶(Ascorbate peroxidase,APX),命名为CaAPX,基因全长1097bp,开放阅读框753bp,编码250个氨基酸.荧光定量Real-time RT-PCR对杜鹃红山茶7种组织和温度胁迫下该基因的表达模式进行分析,结果表明,CaAPX基因在杜鹃红山茶7种组织中均得到表达,但表达水平不一,表达量由高到低依次为:未成熟果实>叶>花苞>叶芽>种胚>花瓣>花芽,其中未成熟果实中的表达量高达其他组织的2.68~11.44倍;温度胁迫处理8h后该基因呈上调表达,CaAPX表达量分别高达0h的3.49和2.67倍.CaAPX转基因烟草分析表明,过量表达CaAPX后,转基因烟草中CaAPX表达量提高了39.71~156.12倍,APX酶活性提高了2.58~4.09倍,AsA含量也提高了2.67~3.56倍,并且转基因烟草植株抗寒、耐热能力也获得提高.
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根据山茶(Camellia japonica Linn.)同源序列设计特异性引物,利用同源克隆和3,5-RACE技术,从杜鹃红山茶(C.azalea)嫩叶组织中克隆出半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Cysteine proteinase inhibitor, CPI),命名为CaCPI,基因全长579bp,开放阅读框306bp,编码101个氨基酸,分子量为11.078KDa,等电点pI=6.72.利用荧光定