非既定PAM序列在人类细胞中对CRISPRCas9介导的DNA切割的影响

来源 :中国动物学会细胞与分子显微技术学分会第十七次学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:luocheng890924
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CRISPR/Cas9介导的DNA切割(CRISPR/Cas9-mediated DNA cleavage,CCMDC)逐渐应用于基因组编辑.在CRISPR/Cas9靶序列的设计中, 最重要的组成部分包括靶向序列邻近的前间隔序列邻近基序(Proto-spacer adjacent motif,PAM).据报道,在人类EMX位点,在非既定PAM序列中NAG序列的效率是高的,但该结果在其他位点是否具有普遍性尚不明确.在本研究中,我们利用GFP报告系统,在人类细胞中定量研究CRISPR/Cas9介导的DNA切割过程中非既定的PAM序列对其影响.我们设计了16个具有不同PAMs的CRISPR/Cas9,对相应的切割效率进行比较.结果显示,NGA序列在非既定PAM的效率高于其他的.
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