转染乳腺上皮细胞为供核细胞制备克隆羊

来源 :中国畜牧兽医学会兽医产科学分会第五届全体会议第十次学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:baimn1990
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为研究转基因乳腺上皮细胞发育的全能性,利用电转染方法将人乳铁蛋白(hLF)乳腺特异性表达载体电转染山羊乳腺上皮细胞,经G418和PCR筛选获得阳性克隆细胞株,经催乳素诱导的细胞株上清液用Western-blot方法检测hLF的表达。以转基因与上清液中表达hLF均为阳性的细胞为核供体细胞,进行山羊体细胞核移植。 结果为:16株细胞表达重组hLF,分子质量为75 kD; 将144枚重构胚移入16只同步发情的山羊输卵管中,在移植后的30、60和90 d的妊娠率分别为87.5%、81.3%和62.5%:最终3只受体妊娠足月,产下3只克隆羊,克隆效率为2.1%,PCR-RFLP分析表明克隆羊均来自供体羊细胞,但没有整合外源基因。 结果表明,hLF转基因乳腺上皮细胞能分泌hLF;乳腺上皮细胞经转染、筛选和长期培养的条件下,能保持发育的全能性。
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