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目的：对中国BTV4型VP5蛋白制备型特异性单克隆抗体(MAbs)，为BTV4的型特异性检测方法的建立以及VP5蛋白功能研究奠定基础。方法:提取BTV4的RNA，设计特异性引物对目的基因SS进行反转录-PCR;利用pMAL-c4、原核表达系统和Bac-to-Bac真核表达系统对VPS蛋白进行表达，纯化以及生物学特性鉴定;利用传统杂交瘤细胞融合技术制备BTV4 VP5蛋白的MAbs并且对其进行特性鉴定。结果:成功获得具有良好生物学活性的BTV4 VP5蛋白;制备出6株针对BTV4 VP5蛋白的MAbs, Western-blot结果显示每株MAb均可以与重组VPS蛋白和天然VP5蛋白发生特异性反应;间接免疫荧光(IFA)结果表明6株MAbs均可以与BTV4感染的BHK-21细胞呈现特异性反应;IFA系统鉴定表明:MAb 1B6只能与BTV4呈现特异性的反应;其余5株MAb、与其它23个血清型BTV反应谱系不同，而6株MAbs均不与茨城病病毒(IBAV)和中山病病毒(CV)发生反应。结论:在本研究中，最初试图表达全长BTV4 VP5蛋白，但无论是真核表达还是原核表达，VP5蛋白表达量都很低。经查文献查阅发现，VP5蛋白N端前41个氨基酸形成两个亲水亲脂的双螺旋结构，对细胞膜具有穿透作用，因此对细胞具有毒性进而影响VP5蛋白的有效表达。为解决这一问题，把VP5蛋白N端41个氨基酸缺失表达，结果其真核表达和原核表达表达量都很大，并且保持良好的生物学活性，能够被BTV4羊阳性血清所识别。