哺乳动物GABA受体α1亚基与果蝇LCCH3亚基的克隆、表达及二级结构测定

来源 :中国化工学会农药专业委员会第十三届年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:new_spider
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通过RT-PCR技术以人脑CDNA文库和果蝇CDNA为模板,克隆了哺乳动物GABAA受体α1亚基信号肽除外的大部分基因片断和果蝇GABA受体亚基LCCH3胞外区域,将它们分别克隆至pET-30a和pET-32a表达载体上,测序结果表明获得的序列与基因库中已发表的基因序列同源性达99%,无移码突变,且在IPTG的诱导下,在大肠杆菌中进行了成功的表达。并采用镍柱亲和层析法纯化了目的蛋白,对纯化蛋白采用圆二色谱法测定了二级结构,表明α1为α-螺旋结构与无规卷曲相混合的构象状态,而LCCH3为富含β结构和相对宽的α链的组分,并将与农药有关的3个氨基酸进行定点突变和诱导表达,表明Arg67,Thr26l的突变可以使蛋白对氟虫腈的结合力增强。
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