【摘 要】
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Integrin(整合素)被认为是激活宿主细胞F-actin(F-肌动蛋白)聚集重排信号转导的最重要受体,在顶复门原虫入侵过程中起重要作用.本研究拟通过抗体阻断及基因干扰ITGA2表达
【机 构】
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广东省农业科学院动物卫生研究所,广东省畜禽疫病防治研究重点实验室,广东省公共卫生公共实验室,广州 510640
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会
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Integrin(整合素)被认为是激活宿主细胞F-actin(F-肌动蛋白)聚集重排信号转导的最重要受体,在顶复门原虫入侵过程中起重要作用.本研究拟通过抗体阻断及基因干扰ITGA2表达量改变integrin的活性,研究其介导的宿主细胞F-aetin聚集对鸡球虫入侵的作用.利用抗integrin单克隆抗体拮抗剂—ITGA2单克隆抗体孵育HCT-8细胞,终浓度分别为1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL,接入一定剂量的新鲜柔嫩艾美耳球虫Eimeria tenella子孢子6h后,提取总RNA,利用Real-time PCR方法检测F-aetin(F-肌动蛋白)聚集前后子孢子的入侵率；以HCT-8细胞总RNA为模板,利用RT-PCR方法扩增ITGA2基因,分别构建ITGA2基因过表达重组载体pEGFP-C1-ITGA2和基因缺失重组载体pEGFP-silence5.0-ITGA2,采用脂质体转染法转染HCT-8细胞,制备稳定转染的ITGA2基因过表达细胞系及ITGA2基因缺失细胞系,接入一定剂量的新鲜Eimeria tenella子孢子6h后,利用Real-time PCR方法检测子孢子的入侵率.结果显示ITGA2单克隆抗体孵育HCT-8细胞后感染子孢子,随抗体浓度的增加,子孢子的入侵率下降20％-80％；将ITGA2基因过表达细胞感染子孢子,入侵率上升30％；而子孢子感染TGA2基因缺失细胞,入侵率下降90％.结论：抗体阻断及ITGA2基因表达量的改变直接导致integrin活性的改变,进而影响鸡球虫的入侵,本研究初步证明integrin介导的宿主细胞F-aetin聚集在鸡球虫入侵过程中起着非常重要的作用,为鸡球虫入侵机制的深入研究奠定了工作基础.
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