用伊氏锥虫优势变体(Hb Tat1.18)纯化抗原作为免疫原免疫小鼠，利用淋巴杂交瘤融合技术，筛选出两株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为3D7、589。经间接EUSA检测3D7、589杂交瘤细胞培养上清效价和腹水效价，其中细胞培养上清效价分别为1：6400和1：12800，腹水效价分别为1：105和1：106。单抗的亚型鉴定结果表明，3D7、589分泌的抗体都为IgG1亚类K链。应用589株杂交瘤细胞纯化的单克隆抗体，建立了检测伊氏锥虫分泌抗原的双抗体夹心ELISA检测方法，并利用该方法初步检测了采自广西部分地区的水牛血清样品，结果在各地采集的样品中均检出阳性血清，阳性率为6.8％，说明广西各地水牛均存在伊氏锥虫现症感染。伊氏锥虫单克隆抗体的制备以及双抗体夹心ELISA检测方法的建立为水牛伊氏锥虫的病原学、免疫学研究以及本地区水牛伊氏锥虫病的监测、诊断和防控提供了有力的技术支持。