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为探讨脑心肌炎病毒(EMCV)感染后促炎细胞因子的表达水平、从分子水平深入研究EMCV的致病机制，分别针对小鼠促炎细胞因子IL-1β、TNF-α以及管家基因β-actin的基因序列设计了1对特异性引物和一条探针，构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品，建立了检测IL-1β、TNF-α和β-actin的TaqMan real-time PCR检测方法。该方法线性关系好，两种细胞因子及管家基因标准曲线的相关系数均达到0.998以上：敏感性高，初始模板的检出下限均达到1×101copies/μL：特异性强，只有以总RNA反转录成的cDNA为模板，并加入特异性引物和探针的反应才检测到荧光信号：重复性好，组内与组间的变异系数均小于2％。应用所建立的检测方法，对猪源EMCV GXLC株感染小鼠的脑、心、脾中IL-1β、TNF-α mRNA的表达水平进行了检测。结果表明，本研究建立的TaqMan real-time PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好，可以用于小鼠促炎细胞因子的检测及定量分析。