【摘 要】
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目的：1.以伯氏疏螺旋体标准株B31株基因组DNA为模板,PCR扩增bmpA全基因序列,定向克隆和高效表达重组bmpA并纯化.内容：1.BmpA基因的定向克隆与重组菌的产生：以伯氏疏螺旋体标
【机 构】
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昆明医科大学热带医学研究所 昆明 650500
【出 处】
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第四届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛
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目的：1.以伯氏疏螺旋体标准株B31株基因组DNA为模板,PCR扩增bmpA全基因序列,定向克隆和高效表达重组bmpA并纯化.内容：1.BmpA基因的定向克隆与重组菌的产生：以伯氏疏螺旋体标准株B31株基因组DNA为模板,设计定向克隆引物,PCR扩增bmpA全基因序列,将bmpA基因定向克隆入表达载体pGEX6p-1,酶切鉴定,转化大肠杆菌BL21菌株,获得bmpA重组菌.2.重组bmpA高效表达与纯化：从重组菌培养温度,诱导时间,诱导剂的剂量,OD600等方面优化诱导条件,找到高效表达重组bmpA的最佳方案.用GSH柱纯化重组bmpA,探索纯化bmpA的最佳条件.结果：1.在基因水平和蛋白水平上,都出现了目的条带和目标峰,确定表达载体bmpA-pGEX-6p-1构建成功,并表达重组bmpA.2.通过分析比较,重组质粒在37℃,IPTG诱导浓度为0.1mmol/ml,诱导时间为6小时,菌液的OD值为0.5-1.0以及在LB培养基上培养GST-bmpA融合蛋白表达量达到最大.3.在最佳表达条件下1L的重组菌能纯化到2.9-3.1mg的bmpA蛋白.结论：成功的构建了表达重组蛋白bmpA的大肠杆菌原核表达系统,并且本研究在基因水平和蛋白水平上得到鉴定.找到了高效表达重组BmpA的最佳方案.用GSH柱纯化重组BmpA,探索出纯化重组BmpA的最适条件.
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