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目的 :探索TLR3介导抗炎细胞因子IL-1Ra分泌的作用机制。方法 :使用si RNA或小分子抑制剂抑制信号通路中特定信号分子的表达或磷酸化;ELISA和荧光定量PCR检测细胞因子的分泌或表达;免疫印迹检测蛋白质激酶磷酸化水平。结果 :使用TLR1-6的配体刺激人FLS,发现TLR3的双链RNA配体聚肌胞(Poly(I:C))和TLR4的配体LPS可刺激滑膜成纤维细胞(fibroblast-like synoviocyte,FLS)分泌IL-1Ra,但Poly(I:C)的诱导效应强于LPS。Poly(I:C)不仅是TLR3的配体,还是MDA5和RIG-I的配体。通过使用TLR3、MDA5和RIG-I的si RNA分别抑制其表达,发现Poly(I:C)刺激FLS分泌IL-1Ra的效应依赖于TLR3,不依赖于MDA5和RIG-I。Poly(I:C)可刺激FLS、软骨细胞、椎间盘髓核细胞以及单核细胞来源的巨噬细胞和树突细胞分泌IL-1Ra。人皮肤成纤维细胞、骨髓间充质干细胞、人胚肺成纤维细胞株WI-38、人非小细胞肺癌细胞株NCI-H358、人神经母细胞瘤细胞SHSY5Y、人T细胞和B细胞中,Poly(I:C)均不能诱导IL-1Ra。TLR3介导IL-1Ra产生不依赖于如IFN-β等,任何细胞因子的从头合成,可直接介导细胞分泌IL-1Ra。TLR3介导IL-1Ra产生依赖于转录因子IRF3和NF-κB的活化,不依赖ERK1/2,MSK1/2和p38 MAPK的磷酸化。结论 :TLR3识别病毒双链RNA,诱导分泌I型干扰素,以及IL-6、TNF-α等促炎细胞因子,在抗病毒感染中发挥重要作用。本文发现,TLR3可通过IRF3和NF-κB介导IL-1Ra分泌,提示TLR3的生物学功能可能不仅仅局限于促进炎症,还可介导抗炎信号通路。这将为全面认识TLR3的生物学意义提供了新的视角。