鸡球虫病是由原生动物门艾美耳属的寄生虫感染鸡所引起的一种呈全球性分布的痢疾性疾病,可造成鸡只的生长发育受阻、生产性能下降甚至死亡等危害,是影响禽类养殖经济效益最大的疾病之一,每年造成的损失超过30 亿美元。为了检测柔嫩艾美耳球虫感染鸡血清中特异性抗体水平,原核表达纯化EtMIC4-N 蛋白,采用免疫印迹法确定其反应原性,再以纯化后的蛋白为包被抗原,以生物素标记的羊抗鸡IgG 为二抗,以HRP 结合链霉亲和素为酶标抗体,建立了检测柔嫩艾美耳球虫抗体的BAS-ELISA 方法。经检测,EtMIC4-N 蛋白最佳包被浓度为7 μg/mL,最适封闭液为1％BSA,最佳血清稀释度为1：80,二抗稀释度为1：10 万,酶标抗体稀释度为1：10 万,最适显色时间为15 min,组内和组间变异系数均小于10％。通过动物感染试验验证,结果表明建立的BAS-ELISA 可以用于检测柔嫩艾美耳球虫特异性抗体的检测,并且具有简便,快速,灵敏,成本低等特点。