表面展示EtMIC2蛋白重组乳酸菌抗球虫效果研究

来源 :中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xianfaxianfa
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  [目的]鸡球虫病是由一种或多种艾美尔球虫寄生于肠上皮细胞内所引起的原虫病,严重阻碍养禽业发展.本研究通过基因工程技术将柔嫩艾美尔球虫入侵过程中的微线体蛋白2基因连接到含有聚-γ-谷氨酸合成酶A(Poly-γ-Glutamic Acid Synthetase A,pgsA)表面展示元件的载体上,构建pSIP409-pgsA-EtMIC2重组乳酸菌并进一步研究其抗球虫效果.[方法]本研究以1~23日龄雄性肉雏鸡为实验动物,并成功构建了表达EtMIC2蛋白的pSIP409-pgsA-EtMIC2重组乳酸菌,选取植物乳杆菌NC8,pSIP409-pgsA重组乳酸菌及PBS组作为对照.将体重相近且健康的125只1日龄肉用雏鸡随机分为A、B、C、D、E5组,每组25只分别饲养于严格消毒且无球虫感染的环境中.雏鸡1~15日龄期间,A、B两组每日空腹灌服PBS200μL/只,C、D、E三组每日空腹灌服各自相应菌种2×108cfu/200μL,其中C组灌服重组菌pSIP409-pgsA-EtMIC2,D组灌服pSIP409-pgsA重组菌,E组灌服植物乳杆菌NC8.雏鸡15日龄时,每组处死10只进行外周血中淋巴细胞增殖能力、CD3+CD4+和CD3+CD8+T淋巴细胞含量、细胞因子IL2和IFN-γ分泌量、抗体IgG含量及食糜中SIgA含量的检测.除A组外其它各组余下雏鸡分别于15日龄经口灌服己孢子化的Eimeria tenella卵囊5×104个/只,攻虫8天后,于23日龄处死全部雏鸡,除检测上述指标外,对雏鸡的相对增重率、盲肠病变积分、血便记分、盲肠内容物的卵囊值、OPG、抗球虫指数进行检测.[结果](1)重组菌对E.tenella感染雏鸡免疫水平的影响:球虫感染前、后雏鸡15日龄和23日龄分别对各组雏鸡进行相关免疫指标检测,结果表明,服用乳酸菌后感染前、后均能够提高雏鸡外周血中淋巴细胞的增殖能力,促进外周血中CD3+CD4+和CD3+CD8+T淋巴细胞的生成,进而提高外周血中细胞因子IL-2和IFN-γ的分泌量,而提高雏鸡细胞免疫水平;且能够通过提高外周血中IgG抗体及肠内容物中SIgA抗体的分泌量从而提高雏鸡体液免疫水平.其中pSIP409-pgsA-EtMIC2重组乳酸菌效果最好,植物乳杆菌NC8和pSIP409-pgsA重组乳酸菌相差不大,但明显高于空白组.(2)重组菌对鸡E.tenella的免疫保护效果评价:结果表明,在球虫感染前、后,灌服益生菌的3组雏鸡其平均增重均比B组高,且C组和B相比差异显著(P<0.05);C、D、E三组雏鸡其血便记分均低于B组,且C组最低;B组雏鸡盲肠病变最严重,病变记分平均值达到3.75,显著高于其它益生菌组;灌服益生菌的C、D、E三组雏鸡其卵囊排出量均低于B组,且C组最低;灌服益生菌的三组雏鸡其抗球虫指数分别为158.50、128.66、130.36,均在120~160之间,具有中等的抗球虫效果.[结论]由此得出pSIP409-pgsA-EtMIC2重组乳酸菌具有较好的抗球虫效果.
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