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目的内部核糖体进入位点(Internal Ribosome Entry Site,IRES)是mRNA的5’UTR上一段核酸序列,不需要帽子结构,通过自身形成特定的二级结构,结合相关的起始因子进而与核糖体结合起始翻译。细胞周期蛋白在食管癌中异常高表达且与食管癌的发生发展密切相关,但是我们前期实验发现cyclin基因在食管癌中没有CNV改变,mRNA水平也无明显变化。我们认为细胞周期蛋白在食管癌中的高表达可能与翻译过程相关。研究细胞周期蛋白是否通过IRES起始翻译,阐明细胞周期蛋白在食管癌中异常高表达的分子机制。方法构建插入细胞周期蛋白5’UTR序列的双顺反子报告酶质粒,第一个顺反子RLuc通过帽子依赖型的翻译进行表达,而第二个顺反子FLuc则是通过IRES进行表达。将质粒转染到四株食管癌细胞系,检测两种荧光酶活性。Real-timePCR检测FLuc和RLuc两种荧光酶的mRNA水平。结果实验结果显示空载质粒FLuc/RLuc几乎为零,插入c-Myc 5’UTR的质粒(阳性对照)FLuc/RLuc比值很高,插入细胞周期蛋白5’UTR的质粒也有较高的FLuc活性。Real-time PCR结果显示两种荧光酶的mRNA水平基本一致,排除了其他因素对实验结果的影响。四种食管癌细胞系结果基本一致。结论通过实验可以初步证明细胞周期蛋白具有IRES结构。后期继续对细胞周期蛋白的IRES起始机制进行研究,筛选与细胞周期蛋白的IRES结合的起始因子,进一步证明细胞周期蛋白在食管癌中的异常高表达是通过IRES起始翻译而产生的。