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目的:研究中国16个城市28所医院碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌分子流行病学及耐药机制。方法:收集中国16个城市28所医院2006年7月-2007年7月临床分离的铜绿假单胞菌菌株645株。采用琼脂稀释法及或KB纸片扩散法测定其对亚胺培南等11种常用抗菌药物的敏感性；脉冲场凝胶电泳(PFGE)及多位点序列分型(MLST)分析碳青霉烯类抗生素耐药菌株同源性；E试验法进行金属酶表型筛选；PCR扩增及克隆测序分析碳青霉烯类抗生素耐药菌株主要β内酰胺酶型；采用实时荧光定量反转录PCR(real time RT-PCR)检测耐药菌株外膜孔蛋白OprD2、外排泵MexAB-OprM和AmpC酶的转录水平；PCR扩增并测序分析OprD2基因序列全长。结果:中国28所医院645株铜绿假单胞菌中258株对碳青霉烯类抗生素耐药，占40％；其中亚胺培南及美罗培南不敏感率分别为38.4％和35.2％。多重耐药铜绿假单胞菌227株，占碳青霉烯类抗生素耐药菌株的88.0％；对所测抗菌药物全耐菌株(泛耐药菌株)为28株，占4.3％。碳青霉烯类抗生素不敏感菌株对其他各种抗菌药物的耐药率显著高于碳青霉烯类抗生素敏感菌株。其中246株耐药菌PFGE分成89型。其余12株不能通过PFGE分型；分为64种MLST型。22株菌株金属酶基因型阳性(VIM-2，IMP-9，IMP-1)。所有碳青霉烯类抗生素耐药菌株OXA-50基因均阳性，GES-5基因阳性1株，未检测到质粒介导的AmpC酶及其他碳青霉烯酶基因型。首次在铜绿假单胞菌中发现了CTX-M-13、14、15、3基因型的ESBLs基因。高产AmpC酶菌株仅占碳青霉烯类抗生素耐药菌株的5.4％；外排泵MexAB-OprM显著高表达菌株达50％以上OprD2相对表达量下降菌株占79.8％。结论:我国铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药率高；以多克隆散发为主，部分存在院内克隆播散。金属酶及高产AmpC酶并不是我国铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要机制。外膜蛋白OprD2表达减少及外排泵MexAB-OprM高表达是我国临床分离铜绿假单胞菌菌株对碳青霉烯类抗生素耐药的主要机制之一。