【摘 要】
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目的：阐明调节线粒体在NRCMs和NRFBs间MNTs中传输的机制. 方法：为了掌握MNTs中线粒体的运动特点,笔者构建了含有一段Mitochondria-targeting sequence的腺病毒Adenovirus-Mi
【机 构】
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北京大学第三医院 血管医学研究所 卫生部心血管分子生物学与调节肽重点实验室 心血管受体研究北京市重点实验室,北京 100191
【出 处】
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2014北京大学心血管转化医学论坛
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目的：阐明调节线粒体在NRCMs和NRFBs间MNTs中传输的机制.
方法：为了掌握MNTs中线粒体的运动特点,笔者构建了含有一段Mitochondria-targeting sequence的腺病毒Adenovirus-Mitochondria-EGFP (Ad-Mito-EGFP),它能够将细胞中线粒体标记上EGFP,并通过活细胞工作站追踪MNTs中的线粒体的运动.
结果：MNTs中的线粒体是可以运动的,其平均速度为V=(0.017±0.002) μm/s,最大速度可达到0.26μm/s,并且能够做双向运动.通过免疫荧光染色,笔者观察到所有的MNTs都含有微丝,部分含有微管,而线粒体只存在于含有微管的MNTs中;利用Nocodazole破坏微管可导致含有线粒体的MNTs比例以及MNTs中线粒体的运动速度显著降低;利用Cytocalasin D破坏微丝可引起MNTs的断裂.为了进一步揭示介导线粒体传输的马达蛋白,笔者构建了能够有效地敲减大鼠细胞中KIF5B的表达慢病毒LV-KIF5B-Rat-SiRNA,发现敲减KIF5B使得线粒体在MNTs中的运动速度显著降低,但没有影响细胞中微管的结构.
结论：MNTs中的线粒体依赖于微管结构进行运输,KIF5B是介导线粒体传输的重要的马达蛋白.
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