【摘 要】
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目的：组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1 (Histone lysine specific demethylase 1,LSD1),是2004年由Shi Yang教授课题组首次发现并证实的第一个赖氨酸特异性去甲基化酶[1].
【机 构】
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郑州大学药学院,郑州大学新药研究开发中心,河南郑州 450001
【出 处】
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2014年中国药学大会暨第十四届中国药师周
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目的：组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1 (Histone lysine specific demethylase 1,LSD1),是2004年由Shi Yang教授课题组首次发现并证实的第一个赖氨酸特异性去甲基化酶[1].研究表明,LSD1在多种肿瘤细胞中高表达,如：前列腺癌、结肠癌、肺癌、乳腺癌等.LSD1小分子抑制剂及LSD1的siRNA能抑制肿瘤细胞的生长和增殖.本课题组前期研究报导了一类新型小分子LSD1抑制剂能抑制胃癌细胞系MGC803的生长、增殖及其侵袭和转移 [2].随后,在探索MGC803侵袭和转移机制的研究过程中发现,在胃癌细胞MGC-803中,TGF-β1与LSD1的表达呈正相关性,而在胃黏膜上皮细胞GES-1中,TGF-β1对LSD1的调控作用有明显不同.课题组又进一步研究LSD1对TGF-β1在胃黏膜上皮细胞GES-1中表达的影响,以期更详细的了解LSD1和TGF-β1在胃癌细胞及正常胃细胞中的不同调控机制.方法：设计并构建由shRNA介导的LSD1低表达系统.首先构建LSD1-shRNA质粒载体,利用脂质体2000将其转染入GES-1细胞中.通过观察细胞形态和荧光值来判断质粒是否转染进入细胞,用Western Blot技术和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术分别在蛋白水平和mRNA水平检测LSD1表达量,同时利用Elisa实验和RT-qPCR技术来分别检测TGF-β1蛋白水平和mRNA水平的表达.结果：成功构建LSD1低表达载体,转染结果表明,LSD1在蛋白和mRNA水平上表达均明显降低；Elisa实验和RT-qPCR结果表明,LSD1低表达时TGF-β1在蛋白水平和mRNA水平上也都明显降低.结论：胃粘膜上皮细胞GES-1中,LSD1低表达可在蛋白水平和mRNA水平抑制GES细胞中侵袭和转移重要促进因子TGF-β1的表达,本项研究为LSD1对TGF-β1在正常细胞的调控作用提供了实验依据.
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