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目的:构建并表达抗人红细胞单链抗体融合HIU-1 gp120抗原肽融合蛋白(2E8ScFv-gp120),并检测其生物学功能。
方法:利用重叠引物延伸PCR连接鼠抗人红细胞单链抗体2E8ScFv基因与HIV-1 gP120的C末端基因,2E8ScFv-gp120融合基因插入原核表达载体pET-his,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达和镍亲和层析柱纯化得到2E8ScFv-gP120融合蛋白,用SDS-PAGE和Western blot鉴定纯化的表达产物,ELISA和红细胞凝集试验检测2E8ScFv-gp120融合蛋白活性。
结果:酶切及测序结果表明表达载体pET-his-2E8ScFv-gp120构建成功,SDS-PAGE和Western blot分析表明表达产物以包含体形式在BL21菌中获得高效表达,重组蛋白的相对分子质量(Mr)为31KDa,与预期的相符。融合蛋白经镍亲和层析纯化后纯度可达85%,具有结合红细胞和抗HIV抗体双重功能。
结论:融合蛋白2E8ScFv-gp120构建成功,具有结合人红细胞和HIV-1抗体的双功能活性。