【摘 要】
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目的：克隆人PLCE1基因,构建PLCE1rs2274223和rs3765524GT(PLCE1Minor)和AC(PLCE1Major)单体型真核表达重组载体,研究PLCE1基因多态性及单体型与基因表达的相关性.
方法：利
【机 构】
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第四军医大学药学院药物基因组学教研室西安710032
【出 处】
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中国生物工程学会第十届学术年会暨2016年全国生物技术大会
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目的：克隆人PLCE1基因,构建PLCE1rs2274223和rs3765524GT(PLCE1Minor)和AC(PLCE1Major)单体型真核表达重组载体,研究PLCE1基因多态性及单体型与基因表达的相关性.
方法：利用重叠延伸PCR、In-Fusion技术构建PLCE1真核表达载体;基于同源重组的双点突变技术改造目的基因;利用基因转染实时定量、PCR和蛋白印迹等技术实现PLCE1表达载体在真核细胞中的过表达及表达水平的鉴定.
结果：成功扩增并获得了全长6927bp的人PLCE1cDNA并经过DNA测序证实,与NCBI数据库PLCE1参考序列(NM_016341)比较,发现编码区3554-3572bp处存在18bp连续碱基插入,其余序列基本匹配成功构建了.PLCE1Minor和PLCE1Major两种单体型重组真核表达载体,转染细胞揭示PLCE1Minor型的mRNA转录和蛋白质表达水平均高于Major型.
结论：发现了一种新PLCE1mRNA转录本,成功构建了2种单体型真核表达载体;发现PLCE1rs2274223G-rs3765524T单体型能够促进自身mRNA和蛋白质表达,为进一步揭示PLCE1SNPs与癌症易感性的关系奠定了基础.
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