【摘 要】
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本研究以Delfiia sp.T3-6为材料,通过硫酸铵分级沉淀、DEAE阴离子交换层析、疏水层析及Sephadex G200凝胶层析从粗酶液中纯化出单一条带,活力回收0.28％,纯化倍数为20倍,比
【机 构】
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江西农业大学生物科学与工程学院,江西 南昌 330045
【出 处】
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第十六次全国环境微生物学学术研讨会
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本研究以Delfiia sp.T3-6为材料,通过硫酸铵分级沉淀、DEAE阴离子交换层析、疏水层析及Sephadex G200凝胶层析从粗酶液中纯化出单一条带,活力回收0.28％,纯化倍数为20倍,比酶活为4126.43U/mg,SDS--PAGE电泳确定该蛋白表观分子量约为32.52kD.通过蛋白质N端测序和肽指纹测序得到三条氨基酸序列,根据氨基酸序列从Delftia sp.T3-6中成功的克隆到一个新的酰胺酶功能基因DamH,DamH基因ORF长度903bp,编码300个氨基酸序列；经NCBI比对,该酶是一个具有酰胺酶活性的酯酶.构建了该基因的表达载体pET29a-damH并在E.coli BL21(DE3)进行诱导表达,通过Ni-NTA亲和层析将重组蛋白进行纯化后进行酶学特性研究,酶反应最适温度为35℃,最适酶反应pH=6.0,Mn2+离子对酶活有促进作用,Cu2+、Zn2+、Ni2+、Fe2+对酶活有抑制作用；PMSF、SDS强烈抑制酶的活性.
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