【摘 要】
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目的 以小鼠胚胎干细胞(D3 mESC)为模型,从一般细胞毒性和mESCs的多能性改变两方面来评价全氟辛烷磺酸盐(PFOS)的生殖发育毒性,并进行相关分子机制的初步探讨,为PFOS的毒
【机 构】
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南京医科大学,江苏南京211100
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目的 以小鼠胚胎干细胞(D3 mESC)为模型,从一般细胞毒性和mESCs的多能性改变两方面来评价全氟辛烷磺酸盐(PFOS)的生殖发育毒性,并进行相关分子机制的初步探讨,为PFOS的毒性评价提供线索.方法 MTT检测细胞活力,碱性磷酸酶染色检测细胞形态,碱性磷酸酶活性试剂盒检测AP活力,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,RT-PCR方法检测多能因子的基因表达水平,Western blot检测多能因子的蛋白水平,lipo2000转染miR-490-3p mimics/inhibitor之后,检测Nanog的基因和蛋白水平的改变.双荧光素酶报告基因实验确定miR-490-3p和Nanog之间的关系.结果 MTT结果显示,DMSO,PFOS(0.2,2,20和200 μmol·L-1)染毒mESC 24和48 h后,均不影响细胞活力.不同剂量PFOS染毒mESC后,细胞形态,碱性磷酸酶染色,碱性磷酸酶活力,细胞周期和细胞凋亡均没有统计学差异的改变.多能因子Nanog,Sox2的基因和蛋白水平都显著下降,Oct4的基因和蛋白水平都没有改变.分别调控Nanog和Sox2的miRNA(miR-490-3p,miR-145)都上升,转染miR-490-3p mimics/inhibitor后,Nanog下降/上升.通过构建miR-490-3p-Nanog野生型和突变型质粒,转染后报告基因结果显示miR-4.90-3p直接调控Nanog,Nanog的宿主基因Chrm2在染毒之后上升.结论 PFOS染毒mESC后,多能因子Nanog和Sox2基因和蛋白水平都下降,Oct4基因和蛋白水平都没有改变,miR-490-3p能直接调控Nanog,宿主基因Chrm2可能会调控miR-490-3p.因此,PFOS染毒mESC后,多能因子Nanog的改变可能是由于Chrm2和miR-490-3p的共同调控导致的.
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