【摘 要】
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目的 构建能够表达外源基因的新型鸡痘病毒穿梭载体,从而为基因治疗和新型疫苗研究提供有效载体.方法 采用Illumina高通量测序技术对中国鸡痘病毒株282E4株进行全基因组测序,通过分析序列并参考文献,选择5个非必需CDS区作为同源重组臂,插入含有PE/L早、晚期启动子和终止信号的三基因表达盒,进行新型重组鸡痘病毒载体的构建,分别以红、绿、蓝三种荧光蛋白基因作为报告基因,利用荧光挑斑方法进行重组病
【机 构】
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军事医学科学院军事兽医研究所,吉林长春130122
【出 处】
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第三届东北三省暨内蒙古自治区免疫学学术会议
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目的 构建能够表达外源基因的新型鸡痘病毒穿梭载体,从而为基因治疗和新型疫苗研究提供有效载体.方法 采用Illumina高通量测序技术对中国鸡痘病毒株282E4株进行全基因组测序,通过分析序列并参考文献,选择5个非必需CDS区作为同源重组臂,插入含有PE/L早、晚期启动子和终止信号的三基因表达盒,进行新型重组鸡痘病毒载体的构建,分别以红、绿、蓝三种荧光蛋白基因作为报告基因,利用荧光挑斑方法进行重组病毒筛选,通过PCR、RT-PCR、Western Blot进行病毒整合、转录、外源基因表达活性以及遗传稳定性的验证.结果 成功获得3对重组臂基因,荧光蛋白表达检测结果表明,三个表达盒均可独立表达外源基因,且相互间没有影响;利用同源重组方法,成功筛选出3个rFPV,重组病毒与野生病毒形态学、生物特性以及遗传稳定检测结果表明,基因缺失未影响重组鸡痘病毒的形态及其复制,3株重组鸡痘病毒无差异.
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