【摘 要】
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本研究检测了分离自发病大菱鲆、半滑舌鳎及鲤鱼的22株病原鳗弧菌毒力基因的携带情况,并建立了病原鳗弧菌的分子生物学检测方法.以angM、tonB、vahl、vah4 ClaA、empA、v
【机 构】
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淮海工学院海洋学院江苏省海洋生物技术重点实验室,江苏连云港222005
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本研究检测了分离自发病大菱鲆、半滑舌鳎及鲤鱼的22株病原鳗弧菌毒力基因的携带情况,并建立了病原鳗弧菌的分子生物学检测方法.以angM、tonB、vahl、vah4 ClaA、empA、virA、rtxA为靶基因设计特异性引物,结果表明22株病原鳗弧菌均可扩增出empA、vah1、vah4 flaA、rtxA、tonB基因目的条带,目的条带大小分别为248 bp、493 bp、603 bp、435bp、441bp及195bp,未扩增出virA和angM基因；以所检出的vah4和rtxA两种毒力基因为靶基因设计的两对特异性引物进行的双重PCR扩增,同一PCR反应体系可扩增出603 bp和441 bp两条目的条带,且灵敏度为2.4×103CFU/mL,6株对照菌无任何扩增条带；以yah4设计的4条特异引物进行的LAMP扩增,病原鳗弧菌可扩增出阶梯状条带,反应产物加入SYBR Green Ⅰ荧光染料后反应液呈现明显的绿色阳性反应,6株对照菌无阶梯状扩增条带且呈现橙色阴性反应,灵敏度为2.4×101CFU/mL,LAMP检测灵敏度是双重PCR的100倍.LAMP技术与PCR比较,操作简便、快速、灵敏性高且不需昂贵仪器,LAMP检测鳗弧菌的方法更适合于养殖生产实际应用.
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