【摘 要】
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为建立流行性乙型脑炎病毒(JEV)的定量检测方法,本实验根据JEV的E基因保守序列设计一对特异性引物及探针,并以E基因重组质粒作为标准品,建立检测JEV的TqMan荧光定量PCR方法.
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室 农业部兽医公共卫生重点开放实验室,黑龙江哈尔滨150001
【出 处】
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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会
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为建立流行性乙型脑炎病毒(JEV)的定量检测方法,本实验根据JEV的E基因保守序列设计一对特异性引物及探针,并以E基因重组质粒作为标准品,建立检测JEV的TqMan荧光定量PCR方法.结果显示,该方法的灵敏度可达到10个拷贝,是常规PCR灵敏度的100倍.该方法对其它相关猪病病毒的检测显示均为阴性,特异性好.重复性试验表明该方法的组间和组内的变异系数均小于2％.通过检测未免疫猪和免疫减毒活疫苗猪在感染JEV后的病毒血症及内脏病毒载量,将该方法与JEV传统病毒分离方法进行比较,结果表明该方法与乳鼠脑内接种方法灵敏度相同,比细胞分离方法灵敏度高.本研究可以作为临床检测JEV病毒及评价疫苗保护效力的检测方法.
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