副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,vP)是海水养殖动物的重要病原菌之一,给海洋养殖业带来严重的经济损失。鞭毛是细菌的运动器官,鞭毛蛋白是病原相关分子模式中的一种,能够引发免疫应答反应。本研究探讨在斜带石斑鱼脾脏细胞中,副溶血弧菌鞭毛蛋白怎样引发免疫应答通路。通过先前实验分离纯化得到副溶血弧菌鞭毛蛋白,刺激斜带石斑鱼脾脏细胞系(GS细胞系),实时荧光定量PCR结果显示,鞭毛蛋白的刺激能显著上调GS细胞中TLR5M和TLR5S基因的表达,同时也能引起下游细胞因子IFN-γ2、IL-6及TNF-α基因表达量的上调。利用siRNA敲降GS细胞中的TLR5M及TLR5S后,发现鞭毛蛋白刺激所引起的IFN-γ2、IL-6及TNF-α mRNA表达受到显著抑制。我们进一步研究MAPKs和NF-κB信号途径在IFN-γ2、IL-6及TNF-α产生中发挥的作用,Western Blot和细胞免疫荧光的结果表明,鞭毛蛋白的刺激引起了转录因子ERK、p38及IκB磷酸化水平的变化,NF-κB亚单位p65在鞭毛蛋白刺激下发生核位移。此外,用ERK、p38和NF-κB抑制剂预处理GS细胞后,发现鞭毛蛋白刺激所引起的IFN-γ2、IL-6及TNF-α表达受到抑制。以上结果表明,在斜带石斑鱼脾脏细胞中,副溶血弧菌鞭毛蛋白所引起的IFN-γ2、IL-6及TNF-α mRNA表达通过TLR5M、TLR5S参与,并且激活MAPKs和NF-κB信号途径。增加了我们对副溶血弧菌致病机理的了解,也验证了斜带石斑鱼TLR5M及TLR5S在识别细菌感染的免疫机制中发挥着功能。