【摘 要】
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本研究以柔嫩艾美尔球虫乳酸脱氢酶(LDH)的为研究,运用分子生物学技术成功克隆了EtLDH的ORF序列(966 bp).构建了EtLDH-pcoldI重组质粒,获得重组表达蛋白(53 kDa).重组表达的L
【机 构】
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华南农业大学兽医学院,广州510642;广东省农业科学院动物卫生研究所,广州510640广东省农业科学院动物卫生研究所,广州510640CollegeofVeterinaryMedicine,Texa
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
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本研究以柔嫩艾美尔球虫乳酸脱氢酶(LDH)的为研究,运用分子生物学技术成功克隆了EtLDH的ORF序列(966 bp).构建了EtLDH-pcoldI重组质粒,获得重组表达蛋白(53 kDa).重组表达的LDH在NADH的参与下,能够催化丙酮酸脱氢反应.对NADH和丙酮酸的Km分别为66±0.19μM和0.26±0.08μM.对NADH的Vmax=33.72±0.78umol/min/mg,对丙酮酸的Vmax=12.32±1.21mmol/min/mg.此外以LDH为靶标,大规模筛选商业化化合物库,获得3种能够有效抑制LDH的先导化合物:一种商品化的抗真菌药物依曲康唑能够明显抑制EtLDH活性,IC50为22.31±0.73μM;其次,苯琥胺的IC50值为55.73±1.33μM;此外发现棉酚能够在较低浓度下明显抑制EtLDH活性,其IC50为5.0175±0.3814μM,且随着棉酚浓度的增加,LDH对丙酮酸的Km and Vmax同时在降低,但Vmax/Km比值保持在0.5左右,显示棉酚是通过反竞争性抑制方式抑制了LDH的活性,本研究结果为研制新型抗球虫药物提供了理论和实验基础.
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