【摘 要】
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Ⅰ型鸭甲肝病毒的2A1蛋白是一段只含有20个氨基酸的短肽.序列比对分析发现,其末尾的氨基酸NPG,与口蹄疫病毒2A蛋白完全相同.而口蹄疫病毒2A的末端氨基酸与2B蛋白的氨基酸P一起构成DxExNPGP功能基序.此基序介导核糖体跳跃功能,此功能在2A翻译完成后释放P1-2A蛋白前体,然后允许核糖体继续翻译后面的蛋白,释放的蛋白不与后面的蛋白形成肽键.而鸭甲肝病毒中的 GxExN-PGP是否介导此功能
【机 构】
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四川农业大学动物医学院预防兽医研究所,成都四川;四川农业大学动物医学院禽病防治研究中心,成都四川;动物疫病与人类健康四川省重点实验室,成都四川
【出 处】
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第五届全国禽病分子生物技术青年工作者会议
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Ⅰ型鸭甲肝病毒的2A1蛋白是一段只含有20个氨基酸的短肽.序列比对分析发现,其末尾的氨基酸NPG,与口蹄疫病毒2A蛋白完全相同.而口蹄疫病毒2A的末端氨基酸与2B蛋白的氨基酸P一起构成DxExNPGP功能基序.此基序介导核糖体跳跃功能,此功能在2A翻译完成后释放P1-2A蛋白前体,然后允许核糖体继续翻译后面的蛋白,释放的蛋白不与后面的蛋白形成肽键.而鸭甲肝病毒中的 GxExN-PGP是否介导此功能还不清楚.用鸭甲肝病毒的2A1基因连接两个不同的报告基因,表达后证明了2A1蛋白也执行此功能.但跳跃不完全,还有少量未分开的全长蛋白产生.延伸2A1的N端至VP1序列,用延伸后的序列连接报告基因,表达后证明了延伸越长,核糖体跳跃越彻底.截断2A1的N端序列,证明了2A1序列越短,核糖体跳跃程度越低.且少于12aa时2A1不能执行此功能.GxExNPGP的Ala扫描突变证明了G,E以及第二个P突变不会废除核糖体跳跃功能,但突变会降低核糖体跳跃程度.突变NPG完全废除了2A1蛋白的核糖体跳跃活性.并且证明了核糖体跳跃不受时间影响,即没有分开的全长蛋白之后也不会再断裂.同时发现了2A1上游蛋白EGFP表达量高于下游蛋白RFP.在将上下游报告基因的顺序颠倒后,上下游蛋白表达量一致.提示EGFP位于2A1上游时会影响2A1功能.
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