HER2(人表皮生长因子受体2)阳性乳腺癌的恶性程度高、侵袭性强、进展快、易复发和远处转移,并且预后差。迄今为止,大量证据表明HER2蛋白的表达状态对于癌症的诊断、治疗及预后具有至关重要的意义。因此,特异、灵敏和准确的HER2定量检测方法是提高临床疗效的基本前提。然而,目前临床上以抗体为基础的检测手段(例如免疫组织化学(IHC)染色)通常受限于相应抗体的制备和方法开发,并且这些技术往往不能满足特异性、准确性的需要。核酸适配体(aptamer)具有与抗体相似的识别特性,并且特异性往往更强,但是目前对其检测方法的缺乏限制了它在定量蛋白质方面的应用。本研究中,我们通过联合核酸适配体-多肽(aptamer-peptide)探针与基于液相色谱-质谱串联技术(LC-MS/MS)的准定向蛋白质组学,将HER2蛋白的量化信息转化成报告多肽的质谱信号,实现对HER2的定量测定。Aptamer-peptide探针由核酸适配体HB5和底物多肽(GDKAVLGVDPFR)两部分组成。其中,底物多肽包含了报告多肽(ALGVDPFR)。在对探针的结合效率、稳定性、亲和力、特异性和酶切效率等进行表征的基础上,我们进一步优化了探针的结合条件以及胰蛋白酶的酶切条件,使HER2蛋白的最低定量限达到25p M。最后,我们将此方法应用于HER2阳性乳腺癌细胞(BT474和SK-BR-3)、HER2阴性乳腺癌细胞(MDA-MB-231和MCF-7)以及36对人乳腺癌和癌旁组织中HER2蛋白表达水平的测定,并将实验结果与相应的IHC以及荧光原位杂交(FISH)结果进行比较。