【摘 要】
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根据猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV),JS-2013株,N基因设计引物,RT-PCR扩增出目的大小片段.构建pcold-TF-N重组质粒,并将其转化感受态细胞BL21(DE3)
【机 构】
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中国农业科学院上海兽医研究所猪传染病研究室,上海200241
【出 处】
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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会
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根据猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV),JS-2013株,N基因设计引物,RT-PCR扩增出目的大小片段.构建pcold-TF-N重组质粒,并将其转化感受态细胞BL21(DE3),目的蛋白在上清液中高效表达.采用Ni-NTA柱对重组蛋白进行纯化,得到浓度为1.5 mg/mL的目的蛋白.将纯化的重组N蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,以PEDV N蛋白作为包被抗原,用间接ELISA检测方法筛选阳性细胞克隆,经3次克隆纯化后,获得3株稳定分泌抗PEDV N蛋白特异性单克隆抗体的的杂交瘤细胞株,分别命名为:4D11、2B8和4F8.Western blot和间接免疫荧光法(IFA)试验结果显示该单克隆抗体具有良好的反应性和特异性.
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