猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)是引起母猪繁殖障碍的重要病原体之一,能够在PK-15、ST和IBRS2等细胞中增殖,并且产生典型的细胞病变效应(CPE),但目前对其致病机制仍不清楚.本研究首先应用MTT法检测不同病毒滴度的PPV体外感染对PK-15细胞活性的影响,通过AO/EB染色和DNA片段化分析检测细胞内核的变化情况,利用Annexin V FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡率,从而确定细胞凋亡是否发生,根据Caspase的活性检测及Western blot技术分析死亡受体通路和线粒体通路在凋亡过程中是否被激活.结果表明,1MOI及以上的病毒滴度感染PK-15细胞24h后,细胞的生长活性被显著抑制,并呈现一定的剂量和时间依赖关系.PPV感染导致P K-15细胞染色质固缩,核聚缩、碎裂,形成凋亡小体,最终细胞膜失去完整性.感染细胞的基因组DNA发生明显的片段化,并且DNA片段化程度随着病毒感染剂量增加或感染时间的延长而加剧.细胞调亡率随着病毒感染时间的延长而逐渐上升.Caspase活性检测结果显示,在PPV感染细胞内,Caspase-9与Caspase-3被显著的活化,而Caspase-8活性未检测到明显变化.Western blot检测结果显示,1MOI的PPV感染细胞时,细胞内Caspase-3的底物PARP被降解,促凋亡蛋白Bax表达量随感染时间的延长而逐渐增加,抑制凋亡分子Bcl-2蛋白表达量显著减少,并且6h后细胞浆内Bax向线粒体转位,Cyt c和Smac由线粒体释放到细胞浆中,然而,Fas、FasL及Bid、tBid蛋白表达水平变化不显著.另外,在PPV感染的细胞中,凋亡通路上游信号分子p53蛋白的表达量显著上调,MDM2的表达水平下降,p53抑制剂PFT-a可以有效抑制凋亡过程中Bcl-2表达量的减少和Bax的增加,与对照组相比,PFT-α处理的细胞内Caspase-3的活性和细胞凋亡率显著降低.因此,PPV体外感染能够诱导PK-15细胞发生凋亡,激活Bcl-2家族介导的线粒体通路,并且p53在该凋亡通路中发挥重要作用.本研究将为PPV感染的分子致病机制提供一定的理论依据.