【摘 要】
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目的：探讨建立小鼠胚胎成纤维饲养层最佳分离培养和丝裂霉C处理的方法,以用于分离培养胚胎干细胞。
方法：取不同胎龄的胎鼠制备小鼠原代胚胎成纤维细胞,观察不同胎龄和培养
【机 构】
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山东大学生命科学学院,济南250100
【出 处】
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2003年中国博士后生命科学学术研讨会暨院士论坛
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目的：探讨建立小鼠胚胎成纤维饲养层最佳分离培养和丝裂霉C处理的方法,以用于分离培养胚胎干细胞。
方法：取不同胎龄的胎鼠制备小鼠原代胚胎成纤维细胞,观察不同胎龄和培养、分离条件对细胞增殖的影响；用丝裂霉素C对增殖细胞进行抑制,研究不同浓度和作用时间对细胞的抑制作用。用MTT法测定细胞的数量。取妊娠3.5d的囊胚在经丝裂霉素C处理的饲养层上培养,现察胚胎干细胞集落生成情况。
结果：小鼠胚胎成纤维细胞层制备的最佳胎龄是12.5～14.5d；室温条件下,O.25％胰蛋白酶消化时间最好在3～5 min之内；原代细胞培养2～4d后即可进行传代；丝裂霉素C能抑制胚胎成纤维细胞的增殖,最佳的作用浓度和作用时间是20μg／mL和2～4 h,成纤维细胞饲养层可以维持10 d。囊胚在饲养层上能发育成典型的“鸟巢”状干细胞集落。
结论：12.5～14.5 d胎龄小鼠胚胎分离培养的胚胎成纤维细胞质量最佳,20μg／mL丝裂霉素C处理2～4 h后可以作为饲养层用于胚胎干细胞的分离克隆。
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