【摘 要】
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目的:为配合猪场进行猪瘟与猪伪狂犬病的净化,建立一步法区分野毒与疫苗毒的多重PCR方法(mPCR)显得尤为必要. 方法:本实验通过参照GenBank中CSFV shimen毒株、弱毒疫苗C株
【机 构】
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贵州大学动物科学学院,贵州 贵阳 550025
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目的:为配合猪场进行猪瘟与猪伪狂犬病的净化,建立一步法区分野毒与疫苗毒的多重PCR方法(mPCR)显得尤为必要.
方法:本实验通过参照GenBank中CSFV shimen毒株、弱毒疫苗C株等18株基因序列和PRV闽A株、GDSH株、Ea株、Yangsan株、Guizhou-DY株和Bartha-K61疫苗毒株、SA215三基因缺失疫苗株(缺失TK、gI和gE)和HB-98疫苗株相关基因序列并进行对比分析发现:猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株3'-NCR端独立存在富含T的插入序列,设计2对能鉴别猪瘟野毒和疫苗毒株的特异性引物,扩增片段大小分别为649bp(CSFV野毒)和CSFV378bp(疫苗毒),可区分CSFV野毒感染和疫苗毒株;设计3对PRV特异性引物,扩增片段大小分别为282bp(TK)、549bp(gB)和829bp(gE),可区分PRV野毒感染和疫苗毒株.
结果:通过以这5对引物为基础,成功建立了猪瘟和猪伪狂犬野毒与疫苗毒株5重PCR方法,敏感性和特异性试验结果表明,构建的5重PCR最低核酸检测量分别为6.2pg(CSFV野毒株)、21.3pg(CSFV-C株疫苗毒)、5.8pg(PRGuizhou-DY)、20.8pg(Bartha-K61)和8.6pg(SA215);对PCV2、PRRSV、JEV和E.coli扩增结果均为阴性.采用该方法对134份可疑临床样品进行检测结果发现:CSF和PR疫苗毒与野毒在能繁母猪、育肥猪、保育猪和哺乳仔猪中的5重感染率分别为2.6％(1/38)、7.7％(2/26)、8.3％(3/36)和8.8％(3/34),实现了DNA病毒及RNA病毒的同步检测.
结论:该5重PCR方法的建立为从病原学方面快速鉴别CSF和PR疫苗毒与野毒提供了新的技术支撑,为规模化猪场实现猪瘟与猪伪狂犬的净化奠定了基础.
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