[目的：]由少突胶质细胞前体细胞(OPCs)参与的脊髓损伤(SCI)后轴突的再髓鞘化过程是一个内源性的修复过程,其对挽救残留轴突,促进后期功能恢复具有重要的作用。神经营养因子(NTs)作为一类重要的调控因子,对损伤后神经的再生修复具有重要的调节作用。但近年来的研究发现,神经营养因子前体(proNTs)对神经的损伤后修复具有广泛的抑制作用。本课题组前期的研究发现：脑源性神经营养因子前体(pro-Brain-Derived Neurotrophic Factor,proBDNF)不仅直接抑制轴突的再生和延伸,而且抑制损伤后巨噬细胞介导的炎性浸润反应,特别是影响损伤局部有害物质的清除,提示proBDNF对于损伤后修复的影响不仅仅限于神经元本身.基于上述原因,本实验研究拟观察脑源性神经生长因子前体(proBDNF)对OPCs增殖分裂及迁移的影响。并进一步探讨其与p75NTR信号转导通路的关系。
　　[方法 ]本研究分为体内实验和体外实验两部分.体内实验应用proBDNF抗体治疗SD大鼠T9脊髓损伤模型,观察损伤后BBB评分的改善情况；应用免疫荧光染色观察p75及sortilin在OPCs上的表达以及损伤部位OPCs的分裂及迁移情况,评估proBDNF及其抗体对于OPCs生物学活性的影响；初步探讨proBDNF作用与p75信号通路的关系。体外实验应用小鼠少突胶质细胞前体细胞系OLN-93作为研究对象,测定不同浓度梯度proBDNF对于OLN-93细胞分裂增殖活性的影响；应用细胞划痕实验观察proBDNF对OLN-93细胞迁移活性的影响；应用免疫荧光染色和westem-blot方法观察OLN093细胞表面p75、sortilin及内源性proBDNF的表达；针对proBDNF和p75分子,观察应用不同阻断剂治疗后对OLN-93细胞活性的影响,讨论proBDNF作用与p75NTR信号途径的关系。
　　[结果]内源性的proBDNF抑制SCI后OPCs的增殖分裂和迁移过程。BrdU染色表明proBDNF治疗组的大鼠脊髓内损伤区域处于分裂阶段的OPCs细胞数量明显减少.同时应用proBDNF抗体对proBDNF进行特异性拮抗后OPCs的增殖活性显著提高,功能恢复也明显优于对照组.体外实验亦发现proBDNF对OLN-93细胞的分裂增殖具有明显的抑制作用,且这一作用具有浓度依赖性,其随着proBDNF浓度的升高而增强.proBDNF抗体可以特异性拮抗proBDNF的作用,且不具有明显的浓度依赖.OLN-93细胞的划痕实验证明了proBDNF抑制OPCs细胞的迁移而proBDNF抗体则对细胞的迁移具有促进作用。体内与体外实验均证实OPCs细胞表达内源性proBDNF及其受体p75NTR和sortilin.应用可溶性重组蛋白p75NTRecd-FC及p75NTR特异性抗体的治疗结果提示proBDNF通过p75NTR信号转导通路介导对OPCs增殖和迁移的抑制作用。
　　[结论]内源性proBDNF对OPCs的分裂增殖和迁移具有明显的抑制作用,可以干扰由OPCs主导的再髓鞘化修复过程。这一抑制作用主要通过p75NTR-sortilin途径转导,并可以通过proBDNF及p75的特异性抗体进行抑制.